1. A minta összetettsége :A folyadékkromatográfia általában kevésbé hatékony a nagyszámú komponenst tartalmazó összetett minták szétválasztására. Ennek az az oka, hogy minél több komponens van jelen a mintában, annál nehezebb lesz jó elválasztást és felbontást elérni.
2. Mintamátrix effektusok :A minta mátrixa is zavarhatja a kromatográfiás elválasztást. Például, ha a minta nagy mennyiségben tartalmaz sókat vagy más nem illékony vegyületeket, ezek versenyezhetnek az analitokkal az állófázishoz való kötődésért, ami rossz elválasztáshoz vezet.
3. Oszlop túlterhelés :Ha túl sok mintát fecskendeznek az oszlopra, az túlterhelheti az állófázist, és rossz elválasztást eredményezhet. Ennek az az oka, hogy a mintamolekulák az állófázisban versengenek a kötőhelyekért, ami a csúcsok kiszélesedéséhez és a felbontás csökkenéséhez vezet.
4. Mobil fázis összetétele :A mozgófázis összetétele is befolyásolhatja a folyadékkromatográfia hatékonyságát. Például, ha a mozgófázis túl poláris, az az analitoknak az állófázisban való rossz visszatartásához vezethet, míg ha a mozgófázis túlságosan nem poláris, akkor az analitok rossz elválasztásához vezethet.
5. Hőmérséklet :A hőmérséklet is befolyásolhatja a folyadékkromatográfia hatékonyságát. Például, ha a hőmérséklet túl magas, az megnövekedett sávszélesítéshez és a felbontás csökkenéséhez vezethet, míg ha a hőmérséklet túl alacsony, az rossz csúcsformához és csökkent érzékenységhez vezethet.
6. Műszerezés :A folyadékkromatográfiához használt műszerek minősége is befolyásolhatja annak hatékonyságát. Például, ha a szivattyú nem képes egyenletes áramlási sebességet biztosítani, az rossz elválasztáshoz és csökkent reprodukálhatósághoz vezethet. Hasonlóképpen, ha a detektor nem elég érzékeny, előfordulhat, hogy nem képes kimutatni az analitok alacsony szintjét.
Ezen lehetséges korlátok megértésével és kezelésével lehetséges a folyadékkromatográfiás technikák optimalizálása a maximális hatékonyság érdekében.