Előkészületi szakasz: Ebben a kezdeti szakaszban egy 6 szénatomos cukormolekulát (általában glükózt) kétszer foszforilálnak, hogy fruktóz-1,6-biszfoszfátot kapjanak. Ez a folyamat 2 ATP molekula bevitelét igényli, és a hexokináz és foszfofruktokináz enzimeket használja fel.
Hasítási fázis: Ebben a szakaszban a fruktóz-1,6-biszfoszfát két 3 szénatomos cukorra hasad:glicerinaldehid-3-foszfátra (GAP) és dihidroxi-aceton-foszfátra (DHAP). Ez a 2 molekula egymásba konvertálható, és mindkettő továbbhaladhat az úton.
Kifizetési szakasz: Ez az utolsó szakasz magában foglalja a GAP és a DHAP piruváttá történő átalakítását, amely során ATP és NADH keletkezik. Ez a szakasz több enzimatikus lépésből áll, beleértve a szubsztrát szintű foszforilációs és oxidációs reakciókat. Végül 2 piruvát molekula, valamint összesen 4 ATP és 2 NADH molekula keletkezik minden egyes glikolízisbe belépő glükózmolekulához.